流式細胞分析是一項實驗室細胞分析技術(shù)。回顧流式細胞分析基本概念、免疫檢測方法、流式細胞分析方案主要步驟和適當?shù)膶φ沼兄诖_保流式細胞分析的準確性。后文提供了一些有助成功開展流實驗的要點。

一、什么是流式細胞分析

流式細胞分析是一種可根據(jù)細胞物理和熒光特性，鑒定和/或分選異質(zhì)懸浮細胞群的強大技術(shù)。這是一種單細胞分析方法，非常適合同時獲取大量細胞的單細胞水平定量信息，包括給定類型細胞數(shù)目和細胞內(nèi)特定蛋白含量。

流式細胞分析的部分優(yōu)勢包括快速、可在研究異質(zhì)細胞群時區(qū)分不同細胞亞群的差異，同時支持分析異質(zhì)性細胞群的亞群。流式細胞分析常用于免疫分型和免疫腫瘤學(xué)研究，可分析血液、骨髓和其他樣品類型的血液學(xué)差異。

二、流式細胞分析工作原理

流式技術(shù)依靠流體動力聚焦技術(shù)使細胞懸液樣品形成一股單細胞液流，通過激光束。根據(jù)細胞對入射光線的散射情況，可每秒數(shù)千顆粒的速率，檢測細胞大小和胞內(nèi)復(fù)雜情況。隨后即將生成的模擬數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為數(shù)字數(shù)據(jù)，進行定量和繪圖分析。

根據(jù)流式細胞測定結(jié)果，可確定特定的細胞群和其亞群并通過細胞分選法物理分離，此時會根據(jù)細胞的熒光特性控制其電荷大小，從而實現(xiàn)細胞顆粒的靜電偏轉(zhuǎn)。如需更精細地鑒定亞群，則要使用探針。貼壁細胞和實體組織成功分離并制成單細胞懸液后，也可采用該技術(shù)進行分析。

三、傳統(tǒng)流式細胞儀組件

關(guān)于流式細胞分析的低配置，即使是最基礎(chǔ)的單激光流式細胞儀，一般都會配置至少同時檢測4種熒光染料的濾光片。目前，單次實驗中最多甚至可區(qū)分18種波長的光線。

傳統(tǒng)流式細胞組件包括：

1.用于樣品處理和細胞分選的液流系統(tǒng)

流動室：樣品中的細胞通過流體動力學(xué)聚焦并流經(jīng)激光照射區(qū)。

2.用于熒光檢測的光學(xué)系統(tǒng)

光通過一系列鏡片和濾光片。

根據(jù)大小、內(nèi)部復(fù)雜成分和信號強度檢測細胞。

3.用于信號處理、計算機顯示和分析的電學(xué)系統(tǒng)

光電倍增管將光信號轉(zhuǎn)換為電信號。

信號隨后放大和數(shù)字化。